龟甲胶中猪皮源成分检查项补充检验方法

（BJY 201916）

【检查】猪皮源成分照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）和质谱法（中国药典2015年版四部通则0431）测定。

色谱、质谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI⁺），多反应监测（MRM），选择m/z 774.5（双电荷）→977.8和m/z 774.5（双电荷）→1034.6作为检测离子对。取猪皮源成分参比溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10：1。

供试品溶液的制备取本品粉末0.10g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，照猪皮源成分参比溶液的制备方法同法操作，即得。猪皮源成分参比溶液的制备取新阿胶对照药材0.10g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取取上述溶液5ml，置100ml量瓶中，加入龟甲胶对照药材粉末0.20g，加1%碳酸氢铵溶液80ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，再加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1μl中含1μg的溶液，临用前现配）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，即得。

测定法分别吸取猪皮源成分参比溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。

判定原则（1）供试品的提取离子流色谱中，未同时检出与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时检出与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 774.5（双电荷）→977.8的色谱峰面积值不大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时检出与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 774.5（双电荷）→977.8的色谱峰面积值大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出。

结果判定供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。

起草单位：中国食品药品检定研究院

复核单位：山东省食品药品检验研究院

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