2013006血竭药材（饮片）补充检验方法

国家食品药品监督管理总局

药品检验补充检验方法和检验项目批准件

批准件编号  2013006

国家食品药品监督管理总局

2013年10月16日

血竭

Xuejie

DRACONIS SANGUIS

[检查]  苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红、松香酸  （1）取本品粉末0.2g，加乙醇25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红和松香酸对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml含苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红0.1mg，含松香酸1mg的溶液，作为对照试剂溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液2μl和对照试剂溶液各5μ1，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰乙酸（9：1：0.1）展开，取出，晾干。日光下检视，供试品色谱中，在与苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂色谱相应的位置，不得显相同颜色的斑点；紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的荧光淬灭斑点。再喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的棕黄色斑点；紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的蓝色荧光斑点。若出现相同颜色的斑点，或相同位置有干扰不能判断时，则用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）测定。

苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红  色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.02mol/L醋酸铵溶液为流动相B；按下表进行梯度洗脱：

检测波长520nm。理论板数按苏丹红Ⅳ峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备  取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml约含40μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取上述[检查]（1）项下的供试品溶液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

测定法  取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断  供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

松香酸  色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%甲酸（75：25）为流动相，检测波长为241nm。理论板数按松香酸峰计算，应不低于4000。

对照试剂溶液的制备  取松香酸对照试剂适量，加乙醇制成每1ml约含松香酸100μg的溶液，即得。

供试品洛液的制备  取上述[检查]（1）项下的供试品溶液1ml，加乙醇稀释至10ml，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

测定法  取供试品溶液和对照试剂溶液各10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断  供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

1、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红的高效液相色谱-质谱联用方法验证。高效液相色谱流动相可参照上述[检查]（2）苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅳ、808猩红项下的流动相系统。建议质谱检测参数：装配有电喷雾离子源；扫描方式：ESI+扫描，扫描范围：100～1000m/z。

2、松香酸的高效液相色谱-质谱联用方法验证。高效液相色谱流动相可参照上述[检查]（2）松香酸项下的流动相系统。建议质谱检测参数：装配有电喷雾离子源；扫描方式：ESI+扫描。同时进行一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：105～500m/z。

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